新型动脉粥样硬化循环标志物的定量免疫测定方法的研发
2009-10-03 16:27:26 来源：丁香园 作者： 评论：0 点击：
背景：血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells, SMCs)在动脉粥样硬化进展过程中从动脉基质迁移到内膜，而SMCs功能障碍将加速动脉粥样硬化的形成。低密度脂蛋白（low density lipoprotin, LDL）受体的一种可溶性形式，包含了11个重复的配体结合结构（11 ligand-binding repeats， sLR11）可由内膜SMCs产生的。sLR11的循环浓度可反映内膜SMCs的病理生理情况。此外，已发现LR11基因多态性可能与阿尔茨海默病的发生相关。本研究阐述了夹心免疫法定量检测人血清及脑脊液的sLR11新方法的建立。
方法：使用合成肽或DNA免疫产生针对LR11不同表位的单克隆抗体（monoclonal antibodies，MAbs) A2-2-3、M3和R14。
结果：sLR11可使用聚丙烯酰胺胶凝体电泳法（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分离，是人血清和脑脊液中的一种250 kDa的免疫蛋白，并可通过受体相关蛋白和Mab M3从血清中纯化。使用MAbs M3和R14结合建立免疫方法可定量检测sLR11，检测范围为0.25-4.0ug/L。本实验用5.25％N-甲基-D-葡糖胺预处理血清以降低酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）系统中吸收检测的基质效应。该ELISA方法的线性动态检测范围可囊括不同个体sLR11循环浓度的变化。
结论：本研究建立了夹心ELISA法定量测定血清和脑脊液中的sLR11的新方法。该技术为评估动脉粥样硬化病理生理情况以及可能的神经退行性疾病提供了新的检测技术。
方法：使用合成肽或DNA免疫产生针对LR11不同表位的单克隆抗体（monoclonal antibodies，MAbs) A2-2-3、M3和R14。
结果：sLR11可使用聚丙烯酰胺胶凝体电泳法（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分离，是人血清和脑脊液中的一种250 kDa的免疫蛋白，并可通过受体相关蛋白和Mab M3从血清中纯化。使用MAbs M3和R14结合建立免疫方法可定量检测sLR11，检测范围为0.25-4.0ug/L。本实验用5.25％N-甲基-D-葡糖胺预处理血清以降低酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）系统中吸收检测的基质效应。该ELISA方法的线性动态检测范围可囊括不同个体sLR11循环浓度的变化。
结论：本研究建立了夹心ELISA法定量测定血清和脑脊液中的sLR11的新方法。该技术为评估动脉粥样硬化病理生理情况以及可能的神经退行性疾病提供了新的检测技术。
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