肿瘤浸润淋巴细胞
2011-11-26 09:43:23   来源：   作者：  评论：0 点击：

　　1986年Rosenberg研究组首先报道了肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte,TIL）。TIL细胞表型具有异质性，一般来说，TIL中绝大多数细胞CD3阳性。不同肿瘤来源的TIL细胞中，CD4+T细胞、CD8+T细胞的比例有差异，大多数情况下以CD8+T细胞为主。新鲜分离的TIL中CD25+细胞百分率较低，随着体外加IL-2培养时间的延长，CD25+细胞百分率逐渐升高。NK细胞的标记（CD16，CD56）在TIL体外加IL-2培养过程中有先增高后降低的趋势。

　　用机械处理和酶消化方法，从肿瘤局部分离出肿瘤浸润的淋巴细胞，加入高剂量IL-2体外培养，残存的肿瘤细胞7-13天全部死亡。经IL-2活化的TIL与来自PBMC的LAK细胞比较，其特点是：（1）50-100倍，因此在治疗中可以减少效应细胞和IL-2的用量，而且对LAK治疗无效的晚期肿瘤仍有一定治疗效果；（2）主要由CD8阳性细胞诱导而来，在动物实验中发现TIL杀伤肿瘤作用具有特异性；（3）宿主的抑制状态有利于TIL的杀伤作用，因此治疗时加用环磷酰胺（Cy）100mg/kg可明显提高疗效，可能与免疫抑制药能消除抑制性细胞或因子，增强过继免疫治疗作用有关，因而可减少IL-2的用量，降低毒副反应；（4）可从手术切下肿瘤组织、肿瘤引流淋巴结、癌性胸腹水中获得淋巴细胞，经加IL-2培养后，其生长、扩增能力强于LAK细胞。已有报道应用TIL治疗14例转移性肺癌等晚期肿患者，其中4例肿瘤缩小50%以上，副作用明显低于IL-2/LAK疗法。

　　应用LAK或TIL细胞治疗肿瘤国内外进展都很快，今后发展的方向是：（1）提高LAK细胞的纯度，应用活化LAK细胞贴壁的特性，纯化粘附LAK（adherent-LAK,A-LAK）细胞。在IL-2诱导下数量可增加100倍，而且抗肿瘤转移的作用比LAK强20-50倍。（2）改变继承转移细胞在体内的分布，如改变注射细胞途径和方法，达到局部/区域继承免疫疗法的目的。（3）与其它细胞因子如IL-12、IFN、TNF-α和CSF联合治疗，增强LAK的杀伤活性，另有报道，抗CD3单抗与IL-2协同，能显著提高LAK细胞的数量和杀伤活性。应用CD3单抗诱导的杀伤细胞称为CD3抗体激活的杀伤细胞（CD3McAb activated killer cells,CD3AK），抗体含量在10-20ng/ml即可达到刺激杀伤活性的高峰，体外培养数天后即可出现明显的杀伤活性。CD3AK激活需要单核细胞存在，其增殖速度和细胞毒活性均高于LAK。所有的D3+CD8+T细胞和1-6%CD3+CD4+T细胞可诱导出CD3AK。CD3AK已开支应用于临床。（4）将某些细胞因子（如IL-2、TNF等）cDNA转染LAK或TIL用于基因治疗。
表7-14 影响LAK效应的因素及机理
影响因素调节方式效　　应
促进作用抑制作用
细胞单核-巨噬细胞 双向 T、NK产生IL-2，表达高亲和性IL-2r 产生PGE2，抑制IL-2产生，消炎痛（indomethacin）可解除Mφ抑制作用
肿瘤细胞 双向 肿瘤细胞及其提取物增强混合淋巴细胞肿瘤细胞培养和体外致敏的LAK活性 肿瘤细胞分泌的因子抑制LAK活性
中性粒细胞 负 产生超氧化阴离子（O2-）
红细胞
　
　正
　
　分泌超氧化物歧化酶，抑制O2-作用，促进淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ和表达IL-2R　
细胞因子IL-1正IL-2、IFN-γ产生和IL-2R表达，增强LAK的ADCC效应　
IL-3正+　
IL-4双向+，多为小鼠实验系统-，抑制IL-2诱导的LAK活性
IL-5正协同IL-2诱导LAK活性　
IL-6正协同IL-2诱导LAK活性　
IL-7正单独可诱导LAK活性　
IL-12正协同IL-2诱导LAK活性　
GM-CSF正促进Mφ分泌IL-1、TNF-α　
TNF-α正与IL-2有协同作用，LAK分泌 　
　　TNF-α直接作用　
IFN-γ双向促进LAK分化可通过单核-巨噬细胞分泌PGE2抑制LAK活性
IFN-β负抑制细胞因子产生和受体抑制细胞因子产生和受体表达
LR正促进LAK杀伤活性　
抗体抗肿瘤细胞正促进LAK的ADCC　
抗CD3 正 与IL-2联合应用，促进LAK活性，增加LAK数量　
抗Tac，抗TfR负　封闭细胞表面结构
抗IFA-1负　抑制效应细胞-靶细胞粘附
抗LAK-1负　　
双特异性抗体正抗肿瘤和CD3McAb重构的双特异性抗体　
多糖激素神经肽蘑菇多糖、黄芪正　　
去甲肾上腺素正激活PKC　
生长抑素正抑制腺苷酸环化酶　
糖皮质激素负　-
PGE2负　　
β-内啡肽负　　
环孢菌素A负　-

表7-15 生药活性多糖对细胞因子产生、淋巴细胞功能和抗肿瘤的增强作用
名称调节作用应用范围
香菇多糖
（Lentinan）促进IL-1、IL-2产生免疫增强剂抗肿瘤　
提高Th功能　
促进T细胞分化和CTL杀伤活性　
协同IL-2激活的LAK杀伤活性　
协同IL-2激活的LAK杀伤活性　
枸杞子多糖
（Kycium Bsrbarum polysaccharide,LBS）促进IL-2分泌调节免疫功能
　抗衰老
抗肿瘤（动物实验）
刺五加多糖
（polysaccharide of Acanthopanax Senlicosus,PAS）

　
　促进淋巴细胞对丝裂原的抗癌、抗白血病
增殖反应
协同ConA诱导淋巴细胞分泌
IL-2
诱生IFN
促进CTL活性（动物实验）
　
　
黄芪多糖
（Astragalus polysaccharide,APS）促进淋巴细胞增殖治疗化疗引起
增强Th功能的免疫抑制
增强病毒诱生IFN　
促进IL-1、IL-2产生　
F3成份增强LAK活性