预防新生儿GBS感染　早期筛查很重要
2013-04-28 20:39:04   来源：37度医学网   作者：  评论：0 点击：

　　B族链球菌（GBS），亦称无乳链球菌，定植于健康人群的下消化道与泌尿生殖道，健康人群的携带率与种族区域有关，欧美国家携带率为8%～35%，明显高于亚洲。20世纪70年代以来，GBS引起新生儿感染广受重视。

　　近年来，欧美国家强化预防，新生儿GBS感染得到有效控制，但在免疫功能低下人群或老年人群的严重感染呈上升趋势。在我国，孕产妇人群常规筛查GBS并未普及，国内相关研究资料较少。下文主要介绍实验室筛查技术和预防控制措施。

　　GBS感染的流行

　　GBS为围产期新生儿重要的致病菌之一。经阴道分娩的新生儿，如母体生殖道或直肠携带GBS，在分娩过程中，80%新生儿可携带该菌。GBS可引起严重新生儿感染，如脑膜炎、脓毒症、新生儿肺炎等疾病，其死亡率高达50%，特别是在早产儿或低体重儿中，感染率与死亡率更为突出。目前，欧美等发达国家推荐对妊娠妇女是否携带GBS进行产前筛查。美国疾病预防控制中心于2010年推出的GBS防治指南中明确提出，应对35～37孕周的妇女进行阴道－直肠GBS定植筛查。

　　GBS引起新生儿感染分为两类：早发型感染（EOD）与晚发型感染（LOD）。EOD发生于新生儿出生1周内，而LOD发生于出生后第7天至3个月内。EOD的发病率为（1～4）/1000，死亡率为15%，而低体重儿的死亡率可高达30%～50%。上世纪80年代中期以来，大量临床研究表明，对携带GBS的孕产妇在分娩期间进行抗生素预防，可有效阻断新生儿的GBS感染（主要是EOD，但对LOD发病率无明显影响）。

　　孕产妇B族链球菌实验室筛查

　　样本采集方式

　　在孕期35～37周孕妇的阴道下端与直肠（通过肛门括约肌）进行拭子采集，可提高GBS筛选的阳性率。

　　采集的样本应放入专门的转运管中，在培养前置于4℃条件下，并于24小时内进行增菌。

　　若不能及时处理，采集后的拭子在转运肉汤（多直接选用选择性增菌肉汤）中，室温下可存活数日，但检出率随着时间延长下降。若放于高温条件下，检出率将受到严重影响。

　　样本处理

　　无论采用何种方法鉴定GBS，采集后的样本均应放入选择性增菌肉汤内增菌，可显著提高GBS的检出率。若采集样本直接涂布于哥伦比亚血平皿上，检出率仅为增菌后的50%。

　　选择性增菌肉汤以Todd-Hewitt（THB）为代表。培养肉汤加有萘啶酸（15 μg/ml）与庆大霉素（8 μg/ml）或萘啶酸（15 μg/ml）与多黏菌素（10 μg/ml）。

　　将有采集样本的THB放入36℃，5%CO2的条件下孵育24小时，若发现肉汤有浑浊，可涂布于血平皿上放回CO2孵箱生长，若未见浑浊，可将THB继续孵育24小时，再涂于血平皿（见图1）。

　　GBS鉴定

　　GBS增菌后可在血平皿上良好生长，根据菌落形态、革兰染色（阳性球菌）、触酶试验（阴性）等初步判断。可采用乳胶凝集法直接检测链球菌兰斯非尔德（lancefield）抗原，亦可采用生化鉴定。GBS鉴定方法如下。

　　1. cAMP 试验　GBS可产生环磷酸腺苷（cAMP）因子，此物质促进葡萄球菌β-溶血素的活性。因此，可在两种细菌的交界处溶血力增强，出现箭头型透明溶血区。在羊血琼脂平板上先将β-溶血的金黄色葡萄球菌划一横线接种。再将待检菌与其垂直接种，两者应相距1cm，于35℃孵育18~24小时，GBS菌落出现阳性反应（见图2）。

　　2. 显色培养肉汤　在选择性增菌肉汤内添加显色底物，若有GBS生长，则肉汤显色（如Carrot肉汤可显桔红色），有助于快速发现GBS，特异性可达100%，是一种省时省力又快速的检测方法，但是该方法有4%的非溶血性GBS菌株呈假阴性。

　　3. 显色培养基　GBS在格拉纳德（Granada）培养基上呈现橙色类胡萝卜素色（granadaene），色素的产生与GBS的β-溶血有关，利用这一原理可进行GBS筛选。显色培养基颜色分明，易于判别，但有5%～8%的GBS菌株（非β-溶血GBS）并不产生该色素，因此注意筛查过程中漏诊的GBS（图3）。

　　4. 核酸检测 目前，GBS筛查采用常规培养方法，存在局限性，如耗时长，培养法一般需要24～72小时。对于未常规进行孕期检查，未按要求在35～37周进行GBS筛查，因临产入院的患者，需要迅速得到结果，聚合酶链反应（PCR）检测更有利。PCR针对GBS特有核酸序列，如cAMP因子相关的cfb基因，可在2～3个小时内得到结果。而实时PCR，不仅大大提高了筛查的灵敏度，同时可进行GBS定植量判断，试验可在30～60分钟完成。

　　预防与治疗

　　1.对 GBS阳性的孕产妇，临产前首选青霉素或氨苄西林。对有过敏史，但程度较轻 （无过敏性反应、血管神经性水肿、呼吸窘迫、荨麻疹等体征或症状），可选用头孢唑啉；如过敏严重，且红霉素或克林霉素敏感，可选用此两种抗生素，如耐药，则选用万古霉素。

　　2. 对携带GBS的妊娠妇女，通过产道分娩，新生儿可能定植，可引起新生儿感染。对剖宫产，母婴GBS垂直传播的可能性依然存在，即使在胎膜完好的情况下，下生殖道定植的GBS可上行传播进入宫内感染婴儿，因此，剖宫产的孕妇也应预防GBS新生儿感染。

　　3. 除了药物预防之外，目前发达国家也在积极开展疫苗免疫预防的研究工作，但目前多停留在动物试验阶段，未来可能是GBS预防的解决方式。多价GBS疫苗的制备必须依据本地区人群的血清型分布，因此了解不同区域的GBS血清型具有重要意义。

　　4. 新生儿GBS感染首选青霉素，严重感染者可加用庆大霉素。此外，可选用万古霉素与克林霉素，但国内GBS对克林霉素的耐药率较高。

　　总之，GBS是严重威胁母婴安全的常见致病菌，对于妊娠妇女在孕周35～37周时进行阴道和（或）直肠筛查十分重要，欧美发达国家已广泛开展，并取得良好效果。国外的先进经验为我们提供了良好的借鉴，对我国适宜人群的GBS携带筛查、cps血清型分布、多位点序列分型与国际间的比较是重要的研究课题。