科学家揭示RNA结合蛋白YBX1在急性髓系白血病中的分子机制?
2021-04-07 18:36:42 来源： 作者： 评论：0 点击：
关键字： RNA | YBX1 | 急性髓系白血病
RNA结合蛋白(RBP)是转录和翻译的关键调节因子，通常在癌症中失调。尽管越来越多地认为RBP对于正常的造血和作为致癌基因或肿瘤抑制物的血液系统恶性肿瘤很重要，但是用于维持和维持白血病的基本RBP仍然难以捉摸。
基于此，武汉大学张好建教授团队在Blood杂志上在线发表题为“YBX1 is required for maintaining myeloid leukemia cell survival by regulating BCL2 stability in an m6A manner”的文章。该研究发现：RNA结合蛋白YBX1调控髓系白血病细胞存活并对AML发生发展至关重要，但不影响正常造血和造血干细胞功能。深入的机制研究发现，YBX1与IGF2BPs起协同作用，稳定m6A标记的mRNA，进而调控AML细胞中MYC和BCL2 表达水平。
从8至12周龄的Ybx1cKO和WT小鼠中提取骨髓细胞，用造血干/祖细胞富集试剂盒富集谱系阴性细胞(Lin-)，并在8克/毫升凝聚胺、10纳克/毫升白介素-3、10纳克/毫升白介素-6、20纳克/毫升干细胞因子的存在下用MSCV-MLL-AF9-IRES-YFP逆转录病毒感染两次。通过尾静脉注射将感染细胞(2×105-3×105)移植到亚致死剂量(7.5Gy)照射的C57BL/6小鼠体内。
接下来，将具有稳定表达的shRNAs靶YBX1或shControl的HEK293T细胞接种到12孔板中。用最终浓度为5克/毫升的放线菌素D处理细胞，并在指定的时间点收集。总核糖核酸用三唑提取，逆转录聚合酶链反应分析。肌动蛋白用作内源性对照。根据以前的研究估计了基因的半衰期。在给定时间内，mRNA浓度的消失速率(dC/dt)与衰变速率常数(Kdecay)和mRNA的细胞质浓度(C)成正比。这意味着50%的基因是衰变的
最后，在RIPA用蛋白酶抑制剂鸡尾酒(罗氏)溶解细胞，并在每个泳道上加载到4-12%的SDS PAGE凝胶上。转移后，聚偏氟乙烯膜被封闭，并在4℃下与初级抗体一起孵育过夜。在TBST洗涤三次后，膜在室温下用辣根过氧化物酶结合的二级抗体孵育1小时，然后用TBST再洗涤三次，然后用ECL蛋白质印迹底物孵育并暴露于x光超受体。
综上所述，该研究团队显示YBX1是以m6A依赖性方式维持髓样白血病细胞存活的特别要求。该研究团队发现，YBX1的表达在髓样白血病细胞中显着上调，YBX1的缺失显着诱导凋亡，促进分化，并降低原代人和小鼠急性髓样白血病(AML)细胞在体外和体外的增殖和受损的白血病能力。体内。YBX1的丢失不会明显影响正常的造血功能。从机制上讲，YBX1与IGF2BP相互作用并稳定m6A标记的RNA。此外，YBX1缺乏调节细胞凋亡相关基因的表达，并以m6A依赖的方式促进MYC和BCL2的mRNA衰变，这归因于YBX1缺失导致的存活不良。因此，该研究团队的发现揭示了YBX1在维持髓样白血病存活中的选择性和关键作用，这可能为YBX1在髓样白血病中靶向治疗提供了理论依据。
RNA结合蛋白(RBP)是转录和翻译的关键调节因子，通常在癌症中失调。尽管越来越多地认为RBP对于正常的造血和作为致癌基因或肿瘤抑制物的血液系统恶性肿瘤很重要，但是用于维持和维持白血病的基本RBP仍然难以捉摸。
基于此，武汉大学张好建教授团队在Blood杂志上在线发表题为“YBX1 is required for maintaining myeloid leukemia cell survival by regulating BCL2 stability in an m6A manner”的文章。该研究发现：RNA结合蛋白YBX1调控髓系白血病细胞存活并对AML发生发展至关重要，但不影响正常造血和造血干细胞功能。深入的机制研究发现，YBX1与IGF2BPs起协同作用，稳定m6A标记的mRNA，进而调控AML细胞中MYC和BCL2 表达水平。
从8至12周龄的Ybx1cKO和WT小鼠中提取骨髓细胞，用造血干/祖细胞富集试剂盒富集谱系阴性细胞(Lin-)，并在8克/毫升凝聚胺、10纳克/毫升白介素-3、10纳克/毫升白介素-6、20纳克/毫升干细胞因子的存在下用MSCV-MLL-AF9-IRES-YFP逆转录病毒感染两次。通过尾静脉注射将感染细胞(2×105-3×105)移植到亚致死剂量(7.5Gy)照射的C57BL/6小鼠体内。
接下来，将具有稳定表达的shRNAs靶YBX1或shControl的HEK293T细胞接种到12孔板中。用最终浓度为5克/毫升的放线菌素D处理细胞，并在指定的时间点收集。总核糖核酸用三唑提取，逆转录聚合酶链反应分析。肌动蛋白用作内源性对照。根据以前的研究估计了基因的半衰期。在给定时间内，mRNA浓度的消失速率(dC/dt)与衰变速率常数(Kdecay)和mRNA的细胞质浓度(C)成正比。这意味着50%的基因是衰变的
最后，在RIPA用蛋白酶抑制剂鸡尾酒(罗氏)溶解细胞，并在每个泳道上加载到4-12%的SDS PAGE凝胶上。转移后，聚偏氟乙烯膜被封闭，并在4℃下与初级抗体一起孵育过夜。在TBST洗涤三次后，膜在室温下用辣根过氧化物酶结合的二级抗体孵育1小时，然后用TBST再洗涤三次，然后用ECL蛋白质印迹底物孵育并暴露于x光超受体。
综上所述，该研究团队显示YBX1是以m6A依赖性方式维持髓样白血病细胞存活的特别要求。该研究团队发现，YBX1的表达在髓样白血病细胞中显着上调，YBX1的缺失显着诱导凋亡，促进分化，并降低原代人和小鼠急性髓样白血病(AML)细胞在体外和体外的增殖和受损的白血病能力。体内。YBX1的丢失不会明显影响正常的造血功能。从机制上讲，YBX1与IGF2BP相互作用并稳定m6A标记的RNA。此外，YBX1缺乏调节细胞凋亡相关基因的表达，并以m6A依赖的方式促进MYC和BCL2的mRNA衰变，这归因于YBX1缺失导致的存活不良。因此，该研究团队的发现揭示了YBX1在维持髓样白血病存活中的选择性和关键作用，这可能为YBX1在髓样白血病中靶向治疗提供了理论依据。
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