内皮素对T2D内皮细胞作用的机制
2009-11-01 15:37:13 来源：丁香园 作者： 评论：0 点击：
2型糖尿病粘膜下微血管内皮细胞MAPK活化增加及胰岛素信号传导损伤：内皮素-1的作用。
目的：为了建立从少量人体活检组织中分离、培养粘膜下微血管内皮细胞（MVEC）的方法，对比胰岛素抵抗者及健康对照人群MVEC胰岛素信号分子基因及蛋白质表达。
实验设计及方法：培养2型糖尿病患者及对照人群粘膜下针刺活检的血管间质细胞，应用免疫磁分离筛选内皮细胞。应用Western蛋白质印记及RT-PCR检测蛋白质及基因表达。
结果:扩增的原始MVEC至少99%为内皮细胞。胰岛素受体低表达，但是胰岛素可增加胰岛素受体及胰岛素受体底物-1（IRS-1）的磷酸化，并活化蛋白激酶B（PKB）。IRS-1蛋白表达减少， 应答胰岛素的PKB丝氨酸磷酸化减弱，而2型糖尿病MVEC胞外信号相关激酶（ERK）1/2基础磷酸化及胰岛素刺激磷酸化增强。2型糖尿病内皮素-1（ET-1）mRNA水平明显升高。ET-1增加提高了胞外信号调节激酶（MAPK）磷酸化，其作用可被MEK-1抑制因子PD98059抵抗。2型糖尿病中内皮素ETA及ETB受体拮抗物BQ123与BQ788降低MAPK基础活化，阻止内皮素-1诱导活化。
结论：研究出一套应用少量针刺活检分离培养人MVEC的方法。我们的观察支持包括IRS-1和PI3激酶途径在内的选择性胰岛素抵抗观点，其为2型糖尿病微血管内皮细胞失调的潜在影响因素。实验数据证明了ET-1在未经刺激的2型糖尿病微血管内皮细胞MAPK增强活化中的作用。
目的：为了建立从少量人体活检组织中分离、培养粘膜下微血管内皮细胞（MVEC）的方法，对比胰岛素抵抗者及健康对照人群MVEC胰岛素信号分子基因及蛋白质表达。
实验设计及方法：培养2型糖尿病患者及对照人群粘膜下针刺活检的血管间质细胞，应用免疫磁分离筛选内皮细胞。应用Western蛋白质印记及RT-PCR检测蛋白质及基因表达。
结果:扩增的原始MVEC至少99%为内皮细胞。胰岛素受体低表达，但是胰岛素可增加胰岛素受体及胰岛素受体底物-1（IRS-1）的磷酸化，并活化蛋白激酶B（PKB）。IRS-1蛋白表达减少， 应答胰岛素的PKB丝氨酸磷酸化减弱，而2型糖尿病MVEC胞外信号相关激酶（ERK）1/2基础磷酸化及胰岛素刺激磷酸化增强。2型糖尿病内皮素-1（ET-1）mRNA水平明显升高。ET-1增加提高了胞外信号调节激酶（MAPK）磷酸化，其作用可被MEK-1抑制因子PD98059抵抗。2型糖尿病中内皮素ETA及ETB受体拮抗物BQ123与BQ788降低MAPK基础活化，阻止内皮素-1诱导活化。
结论：研究出一套应用少量针刺活检分离培养人MVEC的方法。我们的观察支持包括IRS-1和PI3激酶途径在内的选择性胰岛素抵抗观点，其为2型糖尿病微血管内皮细胞失调的潜在影响因素。实验数据证明了ET-1在未经刺激的2型糖尿病微血管内皮细胞MAPK增强活化中的作用。
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